趨化因子試劑盒在操作過程中的關鍵要點

更新時間：2025-07-29

瀏覽次數：476

　　趨化因子試劑盒是一種用于檢測趨化因子含量的專業工具，在生命科學研究和臨床診斷中具有重要意義。趨化因子是一類能夠引導細胞定向遷移的小細胞因子或信號蛋白，通過與趨化因子受體的結合，調控免疫細胞的遷移和定位，參與炎癥反應、免疫應答和組織修復等生理過程。

　　趨化因子試劑盒基于酶聯免疫吸附測定法（ELISA）等原理，利用雙抗體夾心法等技術，能夠特異性地檢測樣本中的趨化因子水平。試劑盒中通常包含固相抗體、酶標記抗體、標準品、顯色底物等關鍵組分，通過一系列溫育、洗滌和顯色步驟，最終利用酶標儀測定吸光度，從而計算出樣本中趨化因子的濃度。

　　趨化因子試劑盒在操作過程中的關鍵要點：

　　1、標準品稀釋

　　凍干標準品需用說明書指定的稀釋液（如樣本稀釋液）復溶，靜置10~15分鐘（避免劇烈震蕩），確保完q溶解。

　　按梯度稀釋標準品（如從高濃度到低濃度，依次為1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL等），每一步稀釋需充分混勻（用移液器吹吸5~10次），避免濃度梯度誤差。

　　稀釋后的標準品需在2小時內使用，未用完部分按保存要求處理（見“保存方法”）。

　　2、加樣操作

　　酶標板布局：提前設計孔位（如標準品孔、樣本孔、空白孔、對照孔），記錄每孔對應的樣本編號，避免混淆。

　　加樣量精準：嚴格按照說明書要求加樣（如標準品/樣本50μL、檢測抗體50μL等），加樣時吸頭尖d避免接觸孔壁或液面，防止交叉污染；若有液體濺出，需用吸水紙吸干并消毒。

　　避免氣泡：加樣后若孔內出現氣泡，需用吸頭輕輕刺破，否則會干擾酶標儀讀數。

　　3、孵育控制

　　溫度與時間：孵育溫度（如37℃或室溫）和時間（如60分鐘、90分鐘）需嚴格遵循說明書，建議使用恒溫孵育箱（避免用室溫自然孵育，溫度波動大），孵育時用封口膜密封酶標板，防止液體蒸發或污染。

　　避光孵育：若檢測抗體或酶結合物對光敏感（如說明書標注），孵育時需用鋁箔包裹酶標板。

　　4、洗滌步驟

　　洗滌是減少背景值的關鍵步驟，需使用稀釋后的洗滌液，每孔加液量需充足（如300μL/孔），確保孔內液體完q覆蓋包被面。

　　洗滌次數嚴格按說明書（通常4~6次），每次洗滌后需將酶標板在吸水紙上用力拍干（避免殘留液體影響顯色），但不可用力過猛導致孔內涂層脫落。

　　自動洗板機使用前需校準，手動洗板時避免洗滌液溢出至相鄰孔。

　　5、顯色與終止

　　顯色液需現配現用（若為A、B液混合），加樣后輕輕震蕩酶標板（30秒），確保顯色液均勻分布，然后避光孵育（如37℃、15~30分鐘），密切觀察顯色情況（標準品孔應出現明顯梯度顏色，空白孔無色或極淺）。

　　終止液（如2M H?SO?）具有腐蝕性，加樣時需小心，按順序逐孔加入（避免前后時間差過大），加完后輕輕混勻，此時顏色會由藍變黃（若用TMB底物）。

　　終止后需在10~30分鐘內用酶標儀讀數，超過時間可能導致吸光度值下降。